Netiesioginio ELISA metodo, skirto kiaulių ūminio viduriavimo sindromo koronaviruso IgG antikūnų aptikimui rekombinantinio smaigalio baltymo pagrindu, sukūrimas

Kiaulių ūmaus viduriavimo sindromo koronavirusas (SADS-CoV) yra naujai atrastas kiaulių enterinis patogeninis koronavirusas, galintis sukelti vandeningą viduriavimą naujagimiams paršeliams ir padaryti didelių ekonominių nuostolių kiaulių pramonei.Šiuo metu nėra tinkamo serologinio metodo SADS-CoV infekcijos ir vakcinos veiksmingumui įvertinti, todėl skubiai reikia naudoti veiksmingą su fermentais susietą imunosorbentinį tyrimą (ELISA), kad būtų kompensuotas šis trūkumas.Čia buvo sukonstruota rekombinantinė plazmidė, ekspresuojanti SADS-CoV smaigalio (S) baltymą, sujungtą su žmogaus IgG Fc domenu, kad susidarytų rekombinantinis bakulovirusas ir ekspresuotas HEK 293F ląstelėse.S-Fc baltymas yra išgrynintas proteino G derva ir išlaiko reaktyvumą su anti-žmogaus Fc ir anti-SADS-CoV antikūnais.Tada S-Fc baltymas buvo naudojamas netiesioginiam ELISA (S-iELISA) kūrimui ir S-iELISA reakcijos sąlygoms optimizuoti.Dėl to, išanalizavus 40 SADS-CoV neigiamų serumų OD450nm vertę, patvirtintą imunofluorescenciniu tyrimu (IFA) ir Western blot metodu, nustatyta, kad ribinė vertė yra 0,3711.6 SADS-CoV teigiamų serumų variacijos koeficientas (CV) S-iELISA tyrime ir tarp jų buvo mažesnis nei 10%.Kryžminio reaktyvumo testas parodė, kad S-iELISA neturi kryžminio reaktyvumo su kitais kiaulių viruso serumais.Be to, remiantis 111 klinikinių serumo mėginių aptikimu, bendras IFA ir S-iELISA sutapimas buvo 97,3%.Viruso neutralizavimo testas su 7 skirtingomis serumo OD450nm reikšmėmis parodė, kad S-iELISA nustatyta OD450nm vertė teigiamai koreliavo su viruso neutralizavimo testu.Galiausiai S-iELISA buvo atlikta su 300 kiaulių ūkio serumo mėginių.Komerciniai kitų kiaulių enterovirusų rinkiniai parodė, kad IgG teigiami SADS-CoV, TGEV, PDCoV ir PEDV rodikliai buvo atitinkamai 81,7%, 54% ir 65,3%., atitinkamai 6 proc.Rezultatai rodo, kad S-iELISA yra specifinis, jautrus ir atkuriamas, todėl gali būti naudojamas SADS-CoV infekcijai kiaulių pramonėje nustatyti.Šis straipsnis yra saugomas autorių teisių.Visos teisės saugomos.